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    DNA提取技術(shù)服務(wù)為你講述DNA提取的方法

    發(fā)布時(shí)間： 2022-02-25　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1354次
     
    　　DNA提取技術(shù)服務(wù)：從石蠟包埋組織中純化基因組DNA：先快速純化高品質(zhì)、即用型DNA，然后重復(fù)性好，產(chǎn)量高，Z后去除污染物和抑制劑。
    　　DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有硅質(zhì)材料、陰離子交換樹脂等。
    　　DNA提取方法：
    　　1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb
    　　2、甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
    　　3、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
    　　4、異丙醇沉淀法:基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))
    　　5、表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
    　　6、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。
    　　7、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
    　　提取原則：
    　　1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性;
    　　2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子;
    　　3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到低程度;
    　　4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。